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技術(shù)文章

脫氮副球菌PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
點(diǎn)擊次數(shù):871 更新時(shí)間:2021-03-31

脫氮副球菌PCR檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟:

①產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體5秒后,5到30℃孵育2到3分鐘。4℃下2000rpm離心5分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后5到30℃孵育0分鐘后,于4℃下2000rpm 離心0分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-0分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 )紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(:00)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

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