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技術(shù)文章

三日瘧原蟲LAMP試劑盒檢測程序
點(diǎn)擊次數(shù):782 更新時(shí)間:2021-01-12

三日瘧原蟲LAMP試劑盒檢測程序:

.  加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 00ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 20 分鐘。
2.  洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向?yàn)V紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液0 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板:同前。
5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液00ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6.  洗板:同前。
7.  每孔加入底物工作液00ul ,置 37   ℃ 暗處反應(yīng)5 分鐘。
8.  每孔加入00ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

操作步驟:

:樣品準(zhǔn)備:取毫升細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細(xì)胞都可以,*已培養(yǎng)48小時(shí)以上),在6000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在6000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無菌PBS洗三次。*將獲得的沉淀用00微升超純水重懸,置于00℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存到2個(gè)月。

2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備:

待各組份融化后先瞬時(shí)離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽性對(duì)照,測試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無菌,戴,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。

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